关于液氮研磨的步骤分析
点击次数：6096 更新时间：2022-01-17
液氮研磨原理：分子生物学是当前生命科学领域的前沿学科，其理论与技术已渗透到各学科领域，而分子生物学实验在生命科学研究中显得相当重要。在实际工作中，许多实验材料比如动物身上的肌肉组织、结缔组织、骨组织、毛发组织等，植物的根、茎、叶、种子等均需磨碎,随后才能对其成分、基因与蛋白质及结构和功能进行研究。
液氮研磨在分子生物学实验中应用广泛，特别是有关核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)的分离。液氮的温度为一196℃，它既能使各种组织成分不易被破坏或降解，又能使组织变硬，脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的温度极低,操作时要特别小心。
液氮研磨步骤：
1、将研钵从烘箱内拿出，用专用容器盛一些液氮备用；
2、将液氮小心加入并浸满研钵，浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时，缓慢加入，防止液氮飞溅)；
3、当第一次加入的液氮挥发*后，立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵)，将组织迅速转移至液氮内，确保组织全部浸没在液氮中；
4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织，将组织打碎成小块，要注意切勿用力过度，要防止组织块飞溅出研钵；在液氮即将挥发完时，使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意，若为植物样本可直接用研杵碾压组织)；
5、待液氮挥发完后，立即加入1/3研钵体积的液氮(注意，加入液氮速度要缓慢，切勿使得液氮冲击力过大，将组织样本冲出研钵)，迅速用研杵研磨组织，根据组织状态的变化程度，在确保组织始终处于冰冻状态下，及时补充液氮进行研磨，(一般30s~1min补充一次，至少需要补充3次以上)，直至组织被研磨成粉末状。
6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解，若裂解液冻于研钵内壁，用研杵轻轻敲击下来，继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合，研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作；
7、静置至样本和裂解液混合物融化，将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中，插入冰块上暂存。
