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关于液氮研磨的步骤分析

点击次数:1652 发布时间:2022-01-17
  液氮研磨原理:分子生物学是当前生命科学领域的前沿学科,其理论与技术已渗透到各学科领域,而分子生物学实验在生命科学研究中显得相当重要。在实际工作中,许多实验材料比如动物身上的肌肉组织、结缔组织、骨组织、毛发组织等,植物的根、茎、叶、种子等均需磨碎,随后才能对其成分、基因与蛋白质及结构和功能进行研究。
 
  液氮研磨在分子生物学实验中应用广泛,特别是有关核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)的分离。液氮的温度为一196℃,它既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的温度极低,操作时要特别小心。
 
  液氮研磨步骤:
 
  1、将研钵从烘箱内拿出,用专用容器盛一些液氮备用;
 
  2、将液氮小心加入并浸满研钵,浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时,缓慢加入,防止液氮飞溅);
 
  3、当第一次加入的液氮挥发完全后,立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵),将组织迅速转移至液氮内,确保组织全部浸没在液氮中;
 
  4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织,将组织打碎成小块,要注意切勿用力过度,要防止组织块飞溅出研钵;在液氮即将挥发完时,使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意,若为植物样本可直接用研杵碾压组织);
 
  5、待液氮挥发完后,立即加入1/3研钵体积的液氮(注意,加入液氮速度要缓慢,切勿使得液氮冲击力过大,将组织样本冲出研钵),迅速用研杵研磨组织,根据组织状态的变化程度,在确保组织始终处于冰冻状态下,及时补充液氮进行研磨,(一般30s~1min补充一次,至少需要补充3次以上),直至组织被研磨成粉末状。
 
  6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解,若裂解液冻于研钵内壁,用研杵轻轻敲击下来,继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合,研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作;
 
  7、静置至样本和裂解液混合物融化,将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中,插入冰块上暂存。
 
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